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ibidi 載玻片|優化活細胞培養
發布時間： 2024-01-18 點擊次數： 1420次簡介：
免疫熒光技術是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。傳統實驗方法用小玻片，先泡酸、再晾干、再 coating、再種細胞、染色、封片成像。
本文章使用新方法，我們將描述在通道載玻片內培養大鼠成纖維細胞（Rat1）的單個實驗案例。然后，我們用AlexaFluor®488鬼筆環肽染色F-肌動蛋白細胞骨架，并用DAPI對細胞核進行復染。
實驗步驟：
培養，固定，染色，成像
培養：
1.在無菌條件下打開ibidi μ-Slide并將其放在μ-Slide架（80003）上。將Rat1細胞懸浮液加入通道中。
2.用提供的蓋子輕輕地蓋住儲液器。可以部分關閉它們。
3.將架子放入培養箱（37°C; 5％CO2）中，讓細胞附著（60分鐘）。然后用無細胞培養基填充兩個儲庫。
4.培養過夜。
固定細胞：
1.通過使用細胞培養抽吸裝置或移液管從儲庫中吸出整個培養基。用Dulbecco's PBS洗滌細胞，緩慢地將液體施加到一個空的儲液器中，并從對面的儲液器中吸出。
2.通過在PBS中使用3.7％多聚甲醛以相同的方法固定細胞。從通道的另一側移除儲液器的液體并等待10分鐘。
洗滌封閉：
1.用PBS洗滌細胞。
2.在PBS中使用0.1％Triton®X-100溶液通透3-5分鐘。
3.在PBS溶液中施加μl的1％BSA 溶液封閉20分鐘。
4.用PBS洗滌細胞
1.從通道中清除所有液體。從通道中吸出液體后，不要讓通道干燥。
2.用AlexaFluor®488鬼筆環肽（1Unit+500μl PBS+ 1％BSA，InvitrogenCorp.）在室溫下培養20分鐘。
3.用PBS洗滌細胞并清空通道。
4.施用DAPI（0.1μg/ ml，Sigma-Aldrich）3-5分鐘。
5.用PBS洗滌細胞并除去所有液體。用滴管瓶注入 Ibidi封片油。用提供的蓋子蓋住儲液器。μ-Slide可以存儲大約4周。
6.在熒光顯微鏡下選擇適當的濾鏡，也可以使用浸油觀察細胞。
優點：
1.高分辨率成像
ibidi載玻片非常適合寬場熒光、共焦成像、FRAP、FRET、FLIM和相差成像。
2.操作快速、簡單
一體式腔室簡化了您的免疫熒光實驗流程。
3.經濟高效的實驗
僅需少量細胞和少量試劑。
深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術實力、壹流的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業。總部設在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，旨在為生命科學的發展提供壹流的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供世界前沿水平和質量穩定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等優質客戶提供優質的產品、技術支持與服務。
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