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什么是基因編輯技術(shù)？（下）

發(fā)布時間： 2024-06-05　　點擊次數(shù)： 1793次

四、轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)因子核酸酶技術(shù)（TALEN）
轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)（Transcription Activator-Like Effector, TALE）核酸酶（Nucleases, TALENs）是一種基因編輯工具，其工作原理與鋅指核酸酶（ZFNs）類似，但是它們使用不同的DNA結(jié)合蛋白。TALEN是一種人工制造的蛋白質(zhì)，由兩部分組成：一個DNA結(jié)合域（TALE）和一個FokI核酸酶。

1、TALE DNA結(jié)合域
TALE蛋白是由植物病原體Xanthomonas細菌產(chǎn)生的，它們可以識別并結(jié)合到植物基因中的特定序列，進而改變植物的基因表達。TALE蛋白的DNA結(jié)合域由多個重復(fù)的氨基酸序列組成，每個重復(fù)序列由34（或35）個氨基酸組成，可以識別并結(jié)合一個DNA堿基。這種結(jié)構(gòu)使得TALE蛋白可以高度特異地識別并結(jié)合到特定的DNA序列。TALE基序串聯(lián)成決定靶向性的DNA識別模塊通過與FokⅠ結(jié)構(gòu)域連接，就形成了TALEN結(jié)構(gòu)。

2、TALEN技術(shù)的優(yōu)點和挑戰(zhàn)
TALENs的DNA識別模塊由一系列的轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)物（TALE）基序組成，每個基序可以識別并結(jié)合一個DNA堿基。這種一對一的識別模式使得TALENs能夠非常精確地定位到基因組中的特定位置。此外，TALENs使用的FokI核酸酶與ZFNs中的相同，這也保證了TALENs有與ZFNs相當?shù)那懈钚省?/span>
當然，TALENs也存在一些局限性。首先，由于TALENs的尺寸要大于ZFNs，因此它們在某些應(yīng)用中可能會受到限制，例如，較大的尺寸可能會影響到TALENs在細胞中的傳遞效率。其次，TALENs的DNA識別模塊包含大量的重復(fù)序列，這可能會增加在大腸桿菌中組裝TALENs編碼基因的難度。然而，這些問題可以通過各種策略來解決，例如使用特殊的組裝方法或改進的傳遞系統(tǒng)。
五、成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列-相關(guān)核酸酶技術(shù)（CRISPR-Cas）
CRISPR-Cas（成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列-相關(guān)核酸酶）系統(tǒng)是一種在細菌和古菌中發(fā)現(xiàn)的自然免疫機制，用于防御病毒和外源質(zhì)粒。目前這個系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于基因編輯。
CRISPR-Cas系統(tǒng)主要由兩個組成部分構(gòu)成：CRISPR序列和Cas蛋白。
CRISPR序列：CRISPR是一段DNA序列，由短的重復(fù)序列（repeat）和間隔序列（spacer）組成。重復(fù)序列高度保守，而間隔序列則來源于過去入侵的病毒或質(zhì)粒，因此是特異的。
Cas蛋白：Cas蛋白是一種核酸酶，能夠切割DNA或RNA。Cas蛋白的種類很多，其中最著名的是Cas9蛋白，被廣泛用于基因編輯。

CRISPR-Cas系統(tǒng)的工作過程可以分為三個階段：
適應(yīng)階段：當病毒或質(zhì)粒入侵時，細菌或古菌會從入侵者的基因中切割出一段DNA，然后插入到自己的CRISPR序列中，形成新的間隔序列。

表達階段：當同樣的病毒或質(zhì)粒再次入侵時，細菌或古菌會將CRISPR序列轉(zhuǎn)錄成RNA（稱為crRNA）。這些crRNA含有來自間隔序列的部分，因此可以識別入侵者的基因序列。

干擾階段：crRNA會引導(dǎo)Cas蛋白找到并切割入侵者的基因，從而防止入侵者的復(fù)制。

CRISPR-Cas系統(tǒng)的原理：
在CRISPR-Cas9系統(tǒng)中，科學(xué)家們通常將crRNA和另一種名為tracrRNA的RNA被設(shè)計成一個單一的導(dǎo)向RNA（sgRNA）。sgRNA可以引導(dǎo)Cas9蛋白精確地切割目標基因。
設(shè)計sgRNA：首先，需要設(shè)計一個sgRNA，它的目標序列與你想要編輯的基因序列相配對。sgRNA通常由一個20個核苷酸的目標序列和一個與Cas蛋白結(jié)合的骨架序列組成。

sgRNA和Cas蛋白的結(jié)合：然后，sgRNA會結(jié)合到Cas蛋白上，形成一個sgRNA-Cas復(fù)合體。在這個復(fù)合體中，sgRNA負責識別目標DNA，Cas蛋白負責切割DNA。

DNA識別和切割：sgRNA-Cas復(fù)合體會在細胞中尋找與sgRNA目標序列配對的DNA序列。一旦找到，Cas蛋白就會在這個地方切割DNA，產(chǎn)生一個雙鏈斷裂。

DNA修復(fù)：細胞會啟動自身的DNA修復(fù)機制來修復(fù)這個雙鏈斷裂。如果在雙鏈斷裂發(fā)生的地方提供一個含有所需突變的同源模板，那么在修復(fù)過程中就會將這個突變插入到基因中，從而實現(xiàn)精確的基因編輯。

CRISPR-Cas系統(tǒng)的優(yōu)點是它的操作簡單，特異性高，可以在任何生物體內(nèi)實現(xiàn)精確的基因編輯。然而，它也有一些缺點，比如可能產(chǎn)生非特異性切割，或者在修復(fù)過程中產(chǎn)生意外的突變。
小結(jié)
基因編輯技術(shù)已經(jīng)在生物科學(xué)研究和應(yīng)用中起到了革命性的作用。從早期的鋅指核酸酶（ZFN）和轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)因子核酸酶（TALEN）技術(shù)，到現(xiàn)在廣泛應(yīng)用的CRISPR-Cas系統(tǒng)，基因編輯技術(shù)的發(fā)展不僅提高了我們對生命過程的理解，也為治療遺傳疾病、改良農(nóng)作物和開發(fā)新的生物技術(shù)提供了強大的工具。雖然這些技術(shù)都有各自的優(yōu)點和挑戰(zhàn)，但是它們的出現(xiàn)無疑已經(jīng)極大地推動了生物科學(xué)的進步。相信在未來，隨著基因編輯技術(shù)的進一步發(fā)展和優(yōu)化，我們期待能夠看到更多的基因編輯應(yīng)用，從而更好地服務(wù)于人類社會。
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