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如何快速測量細胞劃痕寬度？
發布時間： 2021-12-22 點擊次數： 2143次細胞劃痕實驗可謂是性價比高的一個小實驗了。可以在不額外購買實驗設備的情況下，一定程度地評價腫瘤細胞或者成纖維細胞的遷移能力。
在課題組經費的限制下，這個實驗成為很多老板的*。
細胞劃痕實驗本身的操作很簡單，網上有很多教程，此處不贅述。當你辛辛苦苦拿到了下面這張照片時，說明你已經成功了一大半。
接下來的工作就是測量，本文將以此為例，寫出測量的圖文教程。
1. 下載并安裝Image Pro Plus。
2. 點擊File→Open，打開你需要測量的圖片。
3. 增強細胞劃痕邊界的信號，以提高IPP識別準確度。點擊Process，點擊過濾器Filters。
4. 在Filters彈窗中，依次選擇以下參數，需要做3步。 （4.1）在Edge選項下，選擇Sobel。然后鼠標拖右側的小窗口，將細胞劃痕的邊緣拖到這個窗口處，意在增強這個邊界。
點擊Apply之后，可以看到目標圖片已經發生改變，邊界更加清晰了。
（4.2）在Morphological選項下，選擇Close。然后鼠標拖右側的小窗口，使得細胞占滿這個窗口。此步意在通過算法將細胞區域中的空隙都填充上顏色，以提高IPP的自動識別準確度。
點擊Apply之后，可以看到目標圖片再次發生改變。
（4.3）在Enhancement選項下，選擇Lopass，選擇5X5，然后鼠標拖右側的小窗口，使得劃痕邊界處在這個窗口。此步驟意在調整劃痕邊界的平滑度。
點擊Apply之后，可以看到目標圖片又一次發生改變。
5. 增強圖片的對比度。
（5.1）點擊Enhance，選擇Contrast Enhancement，調出下面的設置界面彈窗。
（5.2）拉動圖中的曲線，以獲取合適的對比度。（當然你也可以點擊彈窗中Save選項，保存這個對比度文件。后面測量其它圖片時，到了這一步可以點擊Load調出設置文件。這種操作更有利于減小測量誤差。）
6. 點擊矩形工具，將圖中的細胞寬度框選。如下圖。
7. 點擊Measure中的count/size選項，彈框中點擊measrue，再點擊select measurement。測量參數選擇Area和Box Height。調整Area最小測量值為1000，以便于過濾小面積區域。（注意：如果你的細胞劃痕圖像是橫著的，那就要選擇Box width）。點擊OK。
8. 最關鍵的一步。在manual模式下，點擊select colors，進入選色界面。在HSI模式下通過調整0-255數值或拉動圖中曲線，保證我們畫的矩形選框中盡可能的被填滿紅色。
同樣的，你可以點擊彈窗中的File按鈕來保存你的設置文件，測量其它圖片時之間調用，以減小測量誤差。完成后點擊close。
9. 在count/size界面選擇Option，然后按照下圖進行設置。最關鍵的是選擇filled。完成后點擊OK。
10. 點擊count，可以看到劃痕區域被選擇為多個測量區域，且存在一個最大測量區域被紅色全部充滿。這樣的測量才是符合的。
11. 點擊View，查看數據。其中最大面積及其對應的高度值就是我們需要的數據。
12. 細胞劃痕寬度
細胞劃痕平均寬度=細胞劃痕最大測量面積 / 對應的長度 （eg，本例中細胞劃痕最大的測量面積是1954623，對應長度為2531，那么細胞劃痕平均寬度就是772.3）
13. 測量單位的問題
首先，你的所有圖片應該是在同一倍數的鏡下拍攝，一般10X。此時你采用IPP測量的寬度數值單位是“像素"，如果是多組間的比較，是否有單位對于組間比較無影響。
至于這個像素所代表的實際尺寸，則必須在該顯微鏡10X倍數下重新拍攝一個標尺，然后使用這個標尺進行像素與尺寸的換算，最終得到細胞劃寬度的實際尺寸。
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