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我的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率低，怎么辦？
發(fā)布時(shí)間： 2021-10-09 點(diǎn)擊次數(shù)： 2507次脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)指的是，脂質(zhì)包裹待轉(zhuǎn)染DNA形成復(fù)合體，與細(xì)胞膜融合或內(nèi)吞，進(jìn)入細(xì)胞。然而，大量的脂質(zhì)體-DNA復(fù)合體，只有一小部分能運(yùn)送到細(xì)胞質(zhì)并進(jìn)入細(xì)胞核中。
如何提高脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵，就在這一步：提高復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)的效率。
1、避免使用陰離子試劑，使用新一代聚陽離子試劑，適用范圍廣，毒性相較以前的脂質(zhì)試劑小。
2、使用陽離子脂質(zhì)與DNA的*佳比例，以及一定數(shù)量細(xì)胞的陽離子脂質(zhì)用量。可向購買試劑的公司進(jìn)行詢問。
這是因?yàn)檫^量的脂質(zhì)容易受到培養(yǎng)皿中其他帶電荷物質(zhì)的干擾，如細(xì)胞外基質(zhì)中的硫酸軟骨素。
3、待轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)該從凍存庫中重新培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染過程中，細(xì)胞在匯合狀態(tài)不應(yīng)超過24小時(shí)，單層細(xì)胞應(yīng)處于對數(shù)中期。
4、轉(zhuǎn)染過程中，培養(yǎng)基不建議加入抗生素。轉(zhuǎn)染試劑使細(xì)胞通透性增加，進(jìn)入細(xì)胞的抗生素濃度增加，會(huì)產(chǎn)生一定的細(xì)胞毒性。
5、某些血清蛋白可能會(huì)干擾脂質(zhì)體-DNA復(fù)合體形成，因此應(yīng)在無血清狀態(tài)下形成復(fù)合體，后續(xù)過程可添加血清。
6、提高待轉(zhuǎn)染基因的純度，DNA的260nm：280nm應(yīng)為1.8 。
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